影响Elisa试剂盒检测的因素有哪些？

ELISA即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。由于LISA方法简单 ,方便，灵敏，特异性强且不需要特殊设备(只

需要酶标仪就可以) ,所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。

但是影响ELISA测定的因素有很多，而其操作中需要有一定的技术要求， 如操作手法,环境，样本等,有时常可见到一些错误结

果(即假阳性或假阴性)等，上海佰利莱生物为大家解读ELISA检测的影响因素之一样本的影响

样本的影响有哪些?

1、样本的保存:在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、会造成假阳性;为避免上述问题，在ELISA试剂

盒测定血清标本时最好能新鲜采集;如果不能立即测定,根据相应的时间保存相应的温度，5 d内测定的血清标本可存放于4C，1周后测定的

血清标本应-20C低温冻存;如冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。

2、样本的时间:因为塑料试管能吸附抗原物质，所以样本长时间放在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。恰当的方法是

使用真空采血管;并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加D值，EDTA、 酶抑制剂(如NaN3) 可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

3、样本受细菌污染:因菌体中可能会含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样,可能会产生非特异性

显色而干扰测定结果。

4、样本的凝固:样本凝固不全。在实验中，有的时候心急为了争取时间快速检测，ELISA试剂盒在血液还未开始凝固的时候就强行

离心分离血清,导致血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果;因此血液标本采集

后必须使其充分凝固后再分离血清。

5、样本溶血:溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白

中的亚铁血红素)，ELISA试剂盒在洗涤过程中往往难以*洗脱，它可使H202释放出原生态氧(0)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶

性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性[2]。所以严重溶血标本禁用。

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