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ELISA试剂盒的制备和结构检测
发表时间:2023-04-24
ELISA试剂盒是一种常用于检测生物分子(如蛋白质、抗体等)的分析工具。其制备和结构检测通常包括以下步骤:
制备步骤:
1.表面涂层:将需要检测的分子(如蛋白质、抗原等)固定在微孔板(plate)的表面上,一般使用化学交联或物理吸附等方法实现。
2.阻断:用一些不与被检测分子反应的蛋白质(如牛血清白蛋白、干酪蛋白等)来阻断微孔板上未被固定的表面,避免后续的假阳性结果。
3.加入抗体:加入一种特异性抗体,与被检测分子结合。
4.加入检测物:通常是酶标记的二抗或其他蛋白质,可以与抗体结合,形成信号。
5.加入底物:底物与酶结合,可以被测量(如颜色变化等)。
6.检测:测量样品中的信号,以此来确定被检测分子的存在或浓度。
结构检测步骤:
1.
SDS-PAGE:使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对试剂盒中的蛋白质进行分离和纯化,以确保试剂盒中所含蛋白质的纯度和相对分子质量。
2.Western blotting:将SDS-PAGE中分离的蛋白质转移到膜上,使用特异性抗体检测试剂盒中的蛋白质,以确定试剂盒中是否含有正确的蛋白质。
3.HPLC:使用高效液相色谱(HPLC)等方法对试剂盒中的小分子化合物进行分离和纯化,以确保试剂盒中所含化合物的纯度和含量。
制备步骤:
1.表面涂层:将需要检测的分子(如蛋白质、抗原等)固定在微孔板(plate)的表面上,一般使用化学交联或物理吸附等方法实现。
2.阻断:用一些不与被检测分子反应的蛋白质(如牛血清白蛋白、干酪蛋白等)来阻断微孔板上未被固定的表面,避免后续的假阳性结果。
3.加入抗体:加入一种特异性抗体,与被检测分子结合。
4.加入检测物:通常是酶标记的二抗或其他蛋白质,可以与抗体结合,形成信号。
5.加入底物:底物与酶结合,可以被测量(如颜色变化等)。
6.检测:测量样品中的信号,以此来确定被检测分子的存在或浓度。
结构检测步骤:
1.
SDS-PAGE:使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对试剂盒中的蛋白质进行分离和纯化,以确保试剂盒中所含蛋白质的纯度和相对分子质量。
2.Western blotting:将SDS-PAGE中分离的蛋白质转移到膜上,使用特异性抗体检测试剂盒中的蛋白质,以确定试剂盒中是否含有正确的蛋白质。
3.HPLC:使用高效液相色谱(HPLC)等方法对试剂盒中的小分子化合物进行分离和纯化,以确保试剂盒中所含化合物的纯度和含量。
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