长期:冷冻保藏
冷冻保藏是目前使用较为广泛的长期保藏法之一,适用于所各类微生物,较之于斜面保藏,减少了工作量
延长了保藏时间。
1. 准备斜面或平板新鲜培养物一个,10%的无菌甘油溶液;
2. 用甘油溶液将菌体或孢子洗脱下来,形成菌悬液;
3. 菌悬液分装,冻存管装液 1mL/支,后置于程序降温盒;
4. 将程序降温盒置于-80℃℃冰箱冻存;
5. 可保藏 1-2 年。
活化使用:
1. 将冻存菌株置干冻存盒中取出,准备水浴溶解,切勿常温融化;
2. 将菌株讯速置干水浴速溶,细菌 40℃,直菌 30℃,约 2min 全部溶解后接种到适宜培养基:

3. 采用适宜条件培养完成即可。

收到细胞后的处理:

1)收到细胞后,首先观察瓶身是否完好(注意有无缝隙,裂痕)。

2)显微镜下观察细胞的生长状况,有无细胞漂浮。

3)用新洁尔灭消毒瓶口及瓶身。

4)打开瓶口,再次用新洁尔灭消毒瓶口(可能会有液体溢出,注意不要碰到液体),酒精灯烤瓶口消毒。

5)将培养液转移至50ml离心管或广口瓶中(若细胞漂浮严重,离心培养基,1000g*5分钟,将离心后的培养基转移至另一个大离心管中,留一点吹打细胞沉淀成悬液,回收细胞至原培养瓶),若漂浮不严重,亦离心一下。

6)在原培养瓶中留一部分原装培养液,再补加自己新配的培养基至适当容积,例如4ml,让细胞适应一下环境。  当细胞长到70-80%,冻存大部分,小部分传代。